DH5α-T1感受态细胞

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品牌 :DH5α-T1感受态细胞

货号 :BC121-01

商品毛重 :50.00g

商品名称 :RNA提取系列 300bp-10kb

规格 :100ul×10

商品产地 :北京

单位 :包

储存条件：-70℃保存，避免反复冻融。不适合在液氮中保存。

产品介绍：

DH5α-T1为常规DH5α改进型菌株。缺失核酸酶（endA1）基因，提高质粒的产量和质量；重组酶缺陷型（recA1）减少插入片段的同源重组概率，保证了插入DNA的稳定性。由于lacZΔM15的存在以及lacIq基因的缺失，故不需要加IPTG，只需要添加X-gal就可以进行基于α互补原理上的蓝白斑筛选实验。DH5α-T1在基因组tonA区域的突变使菌株获得抵抗T1和T5噬菌体感染的能力。DH5α-T1感受态细胞由特殊工艺制成，pUC19质粒检测转化效率高达10⁸cfu/μg DNA。

基因型：F- φ80lacZΔM15 Δ(lacZYA-argF)U169 recA1 endA1 hsdR17(rk-, mk+) phoA supE44 thi-1 gyrA96 relA1 tonA

菌株抗性：对氨苄青霉素、卡那霉素、壮观霉素、博莱霉素、庆大霉素、氯霉素和四环素敏感。

质粒转化步骤：（以氨苄青霉素抗性的pUC19质粒为例）

1.将感受态细胞置于冰水浴中化冻。待细胞刚化冻后，加入1-5μl含有1-100ng的质粒DNA到细胞中，用手指拨打管底，轻轻混匀。

2.冰水浴中放置30分钟，不要晃动。

3.42℃热击60秒钟，不要晃动。

4.冰水浴中放置2分钟，不要晃动。

5.加入500μl的室温的SOC或LB培养基。

6.置于37℃摇床中，150-200rpm，复苏培养60分钟。

7.取50-100μl菌液涂布在含有氨苄青霉素抗性的LB平板上。待液体吸干后，倒置平板37℃培养12-24小时。

（平板划线分离法：复苏培养结束后，12000rpm离心30秒钟，弃掉上清，留100μl左右的液体，用200μl吸头轻轻吹打散菌块，取10μl重悬的菌液分多点滴在平板上，倾斜吸头，用吸头头部的侧面将滴在平板上的液体来回划线。这个方法可以获得更大的单克隆菌落。）

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